Leta i den här bloggen


torsdag 14 december 2017

Väitöskirja exosomeista ja exosomaalisesta RNA.sta 2013

https://gupea.ub.gu.se/bitstream/2077/31705/1/gupea_2077_31705_1.pdf

Göteborgin  Biomedisiinisessä kirjastossa  oli esitteillä   abstrakti exosomeista  vuonna 2013 ja otin tämän talteen.  Siinä vaiheessa ei nämä exosomit  tuntuneet niin kiinnostavilta , mutta luettuani Mef Nilbergin kliinisen onkologian kirjan,  huomaan exosomien mahdollisen osuuden kuin uudesta näkökulmasta.  Selasin vanhoja abstrakteja hyllystä ja otan esiin tämän otsikossa mainitun:

Maria Eldh. Exosomes and exosomal RNA, A way of cell-to-cell communication.  Fakulteettiopponenttina toimi  professori Pia Siljander Helsingin Yliopistosta  8.2. 2013.


Tämä väitöskirja  käsittelee kolmessa osatyössä exosomeja.
I. Importance of RNA isolation methods for analysis of exosomal RNA: evaluation of different methods (2012).
II. Exosomes communicate protective messages during oxidative stress; possible role for exosomal shuttle RNA ( 2010).
III.  MicroRNA in exosomes released from liver metastases in patients with uveal melanoma (2013). 

Yhteenveto

Exosomit ovat nanokokoluokan solunulkoisia rakkuloita ja solunsisäistä alkuperää. Ne osallistuvat solujen väliseen kommunikaatioon osittain  siirtämällä exosomaalista RNA-materiaalia solujen kesken. Exosomeja  havaitaan monissa kehonesteissä kuten veriplasmassa,  virtsassa ja rintamaidossa.

Exosomit  eroavat  donorisolujen  RNA-, proteiini- ja lipidirakenteitten komposition suhteen ja niiden molekulaarinensisältö  on näyttänyt omaavan prognostista ja  diagnostista  potentiaalia.
 
Exosomit havaittiin vasta 1980-luvulla ja alunperin oletettiin että ne ovat punasolujen tapa päästä eroon  kypsymisvaiheitten  proteiineista. 1990-luvulla  ja 2000-luvun alkuvaiheissa osoittautui  kuitenkin näiden  pikkurakkuloiden voivan  omata käyttöä  immuunijärjestelmän soluissa. Immuunisolut voivat aktivoida  ja estää  toisia immuunisoluja näitten  exosomien avulla. Senjälkeen onkin exosomit näyttäneet omaavan  merkitystä  monen moisissa biologisissa funktioissa. Kun jokin solu  vapauttaa exosomeja, toiset lähellä olevat solut
 voivat ottaa niitä sisäänsä tai  niitä kulkeutuu verenkierrossa ja muut kauempana olevat solut voivat ottaa  niitä sisäänsä.

Exosomirakenne  käsittää   lipidejä, proteiineja sekä  geneettistä materiaalia RNA-muodossa. Tätä  ainesta voidaan siirtää muihin soluihin . Tämä  spesifisten solujen kyky kuljettaa  kehossa geneettistä materiaalia  exosomiteitse  on herättänyt  suurta mielenkiintoa: voitaisiinhan  juuri  tällaista kykyä käyttää eri tautien merkitsijänä.

Tässä väitöskirjassa on tutkittu  viljeltyjen solujen exosomeja ja myös  niitä exosomeja,  joita on löytynyt maksaan metastasoitunutta uveamelanoomaa potevilta henkilöiltä.

Aluksi  selviteltiin erilaisten RNA-eristysmenetelmien kykyä isoloida exosomaalista RNA:ta.  Seitsemän eri RNA-eristysmenetelmää arvioitiin ja työssä käytettiin koe-eläimen mast-soluja, eli syöttösoluja,  jotka  vapauttavat jatkuvana virtana exosomirakkuloita. 
Osatyö I  osoitti, että  tutkimusmetodin valinta vaikuttaa  lopputuloksen RNA-profiiliin. Tämä on tärkeä huomata, koska usein RNA-profiileja voidaan verrata ottamatta huomioon, millä
menetelmällä RNA on eristetty.

Toisessa työjaksossa  tutkittiin  normaalissa ja stressinalaisessa (oxidatiivisessa stressi) tilassa erittyviä exosomeja, koska haluttiin tietää,  muuttuuko niiden RNA-sisältö olosuhteista ja mitä  vastaanottavassa solussa tapahtuu vastaavasti. Tulokset osoittavat,  että  näiden  exosomien RNA-sisällöt erovat toisistaan, kun verrataan   ilman stressiä ja stressissä viljeltyjä soluja.Tämä osoittaa,
 että eri olosuhteissa erittyneet  exosomit omaavat erilaiset funktiot.

 Osatyö II osoitti,  että stressattujen solujen vapauttamat "hikoamat"  exosomit antavat vastaanottaville soluille ennalta ehtivää  suojaa, vastustuskykyä sietää oksidatiivista stressiä. jos  sitten saman tapainen stressi  alkaa kohdistua niihinkin.  Tällainen  kuntoa kohottava  signaali näytti katoavan, jos soluja sädetettiin UV-C säteilyllä.

Viimeisessa työjaksossa  tutkittiin uveamelanoomapotilaan  exosomeja tarkoituksena löytää  uusia diagnostisia ja prognostisia (ennusteellisia)   merkitsijöitä. Exosomit kerättiin uvea-melanomapotilaiden maksamestastaaseista. Osoittautui, että metastaattista  uveamelanomaa  potevilla oli korkeampi pitoisuus exosomeja  perifeerisessä laskimoveressään  kuin terveillä kontrolleilla.

Melanomaspesifisiä exosomeja  löydettiin ja niiden microRNA-kirjot
 olivat  potilaiden kesken samanlaisia.
(Uvea-melanooma on kasvain, joka saa alkunsa silmän melanosyyteistä ja vaikka primäärituumori olisi menestyksekkäästi saatu hallintaan, kuitenkin kolmasosalle potilasta kehittyy metastaaseja, lähinnä maksaan).

Väitöskirjan johtopäätöksena oli se, että exosomeilla  on osuutta solu-solu-kommunikaatiossa  ja niiden RNA omaa biologista tärkeyttä.  Mahdollisesti uvea-melanooman  diagnoosissa  ja prognoosissa  exosomaalisella RNA:lla on osuutta.

Suomennosta  14.12. 2017 engl. ja ruots. abstraktista.

Inga kommentarer:

Skicka en kommentar